電子生物顯微鏡的圖像采集知識

初學(xué)者可以從不同的渠道獲得共聚焦成像的知識，LSCM附帶的操作手冊包括一些基本的儀器使用方法。但負(fù)責(zé)操作儀器的人一般應(yīng)進行短期的定向培訓(xùn)，對于多用戶使用的電子生物顯微鏡儀器，在獨立操作前，管理人員應(yīng)對其進行短期培訓(xùn)并確保能勝任相應(yīng)的圖像采集工作。初學(xué)者尤其要注意相應(yīng)的操作規(guī)程。其他有用的信息來源包括共聚焦顯微鏡公司的培訓(xùn)課程，光學(xué)顯微鏡的專題研討會及出版物等。

進行圖像采集前，先要熟悉電子生物顯微鏡儀器的基本操作。對于初學(xué)者，建議使用容易標(biāo)記的標(biāo)本進行圖像采集，而不使用難以標(biāo)記或結(jié)果不確定的標(biāo)本。一些好的測試樣品如吸收了一種或多種熒光染料的紙或制備好的熒光珠，它們都是較為明亮的，容易進行共聚焦成像的標(biāo)本。一種尤其有用的標(biāo)本是不同花粉混合的玻片，在多種不同波長的光線激發(fā)時，可產(chǎn)生自發(fā)熒光。這種玻片可以買到，如Carolina Biological，也可通過采集不同植物的花粉自行制備。往往這些標(biāo)本都有某些特定的表面結(jié)構(gòu)，并且在激光束的照射下保持良好。對于活體研究相當(dāng)可靠的測試標(biāo)本是洋蔥表皮或某些水生植物，可自發(fā)熒光或用DiOC6染色。

電子生物顯微鏡儀器在使用前都應(yīng)進行校正，不同的儀器，其校正方法不同，一般應(yīng)由負(fù)責(zé)儀器的管理人員進行，其他人員未經(jīng)許可，不得嘗試進行校正，最好由儀器公司的技術(shù)人員完成。

對電子生物顯微鏡儀器不僅要進行定期的維護和保養(yǎng)，而且應(yīng)注意一些光學(xué)顯微鏡使用的基本常識。所有的玻璃和鏡頭表面都應(yīng)進行清潔，因為蓋玻片和物鏡上的灰塵和油脂常常是圖像質(zhì)量不佳的主要原因。標(biāo)本的封片也應(yīng)注意，蓋玻片的厚度應(yīng)在物鏡的工作距離以內(nèi)。透鏡和標(biāo)本之間的折光率應(yīng)正確匹配，如某些特定NA的物鏡使用正確的鏡油，對于特定的物鏡使用適當(dāng)厚度的蓋玻片，尤其在高倍物鏡時更應(yīng)注意，蓋玻片應(yīng)在載玻片有一定程度的密封，并保持平整。對于固定的標(biāo)本可用指甲油，但在進行圖像采集前，應(yīng)保持其干燥。對于活組織，可使用某些無毒性的密封劑，如凡士林，蜂蠟和羊毛脂效果都不錯。