本文標題："生物學(xué)無菌操作與細胞繼代培養(yǎng)的相關(guān)技術(shù)"
發(fā)布者：yiyi ------ 分類: 行業(yè)動態(tài) ------
人瀏覽過-----時間：2012-12-23 0:55:47
細胞培養(yǎng)技術(shù)
目的
生物學(xué)的研究過程通常需經(jīng)三個階段：首先由基礎(chǔ)的細胞層次開始，接著進入動物模式，最后再進行ren試驗研究；
所以細胞培養(yǎng)技術(shù)是現(xiàn)代生物技術(shù)研究最基本的實驗技術(shù)之一。本實驗是使用F12 培養(yǎng)液來培養(yǎng)人類橫紋肌肉瘤RD 細胞株，
借著實驗的操作過程可使操作者熟悉無菌操作與細胞繼代培養(yǎng)的相關(guān)技術(shù)。
原理
本章節(jié)所介紹之細胞培養(yǎng)相關(guān)技術(shù)有三：
細胞繼代培養(yǎng)技術(shù)：由于細胞貼附在培養(yǎng)皿上需要鈣離子的參與，所以可利用具有螯合鈣離子特性的EDTA ，配合胰蛋白酶(trypsin) 的作用，將細胞自培養(yǎng)皿上分離出來。
細胞數(shù)及細胞存活率計數(shù)技術(shù)：死細胞由于細胞膜破損，所以細胞染劑如：錐藍(trypan blue) 可自由進出細胞膜，因而將死細胞的細胞核染上顏色，但活細胞則否，所以可配合血球細胞計數(shù)盤(hemocytometer) ，于相位差顯微鏡下計算出活細胞數(shù)量并估算出細胞存活率。
細胞保存及解凍技術(shù)：利用抗凍劑DMSO 可以減少細胞于冷凍過程中受到冰晶的傷害，因此在細胞溶液中加入適當比例的DMSO ，則可于液態(tài)氮中長期保存細胞株
材料與器具
實驗儀器及用具
實驗材料
實驗儀器及用具
低溫保存管(cryotube) （細胞用）及低溫保存盒
細胞培養(yǎng)皿(petri dish)
微量吸管及電動吸管(pipette and pipette aid)
血球細胞計數(shù)盤(hemocytometer)
相位差顯微鏡
37℃ 二氧化碳細胞培養(yǎng)箱(CO2 incubator)
恒溫水浴槽(water bath)
無菌操作臺(laminal flow)
桌上型離心機
液態(tài)氮桶
實驗材料
F12 培養(yǎng)液
二次蒸餾水(ddH2O)
胎牛血清(fetal calf serum ；FBS)
重碳酸氫鈉(sodium bicarbonate)
TE(trypsin-EDTA) 溶液
磷酸鹽緩沖液(phosphate-buffer-saline ；PBS)
抗生素（penicillin 100,000 IU/L 及streptomycin 100 mg/L ）
細胞染劑(trypan blue solution 0.4%, w/v)
抗凍劑(dimethyl sulfoxide ；DMSO)
75% 酒精
后一篇文章：使用無菌操作臺前應(yīng)關(guān)閉紫外光燈-熒光顯微鏡廠家 »
前一篇文章：« 由顯微鏡觀察植物水分運輸,了解植物運輸水分的構(gòu)造
tags:顯微鏡百科,金相顯微鏡,上海精密儀器,
生物學(xué)無菌操作與細胞繼代培養(yǎng)的相關(guān)技術(shù),金相顯微鏡現(xiàn)貨供應(yīng)
本頁地址：/gxnews/427.html轉(zhuǎn)載注明
本站地址：/
http://www.xianweijing.org/