本文標題："激光掃描顯微鏡采用了雙光子(和三光子)來激發(fā)"
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激光掃描顯微鏡采用了雙光子(和三光子)來激發(fā)
快掃描共聚焦顯微鏡可控程度不如線頂式(top of the line)
慢掃描顯微鏡掃描模式，有些以攝像速度成像的共聚焦顯微鏡不能
選用多波長照明。以攝像速度成像的顯微鏡要選用裂隙孔徑而不是
針孔孔徑，而前者的橫向及縱向分辨率較差。
有一種快速掃描共聚焦顯微鏡，因為它價格低廉(還有其他原
因)值得一提，它用有多個針孔(約200 000個)的自旋盤同時照明來
檢測標本內(nèi)多點的發(fā)射光。光源可以用激光器或那種用于傳統(tǒng)表面
熒光顯微鏡的寬光譜燈。這種共聚焦顯微鏡的主要優(yōu)點在于它能較
快的采集圖像高達700幀／s，解線率(1ines resolution)為5000線
]。它的圖像可以直接用眼觀察，也可以用靈敏的相機照下來。它
的主要缺點在于自旋盤只能通過獲得光線的1％左右，原因在于自
旋盤內(nèi)的孔需要較大的間隔。最近有一種新型自旋盤共聚焦顯微鏡
問世了，它用顯微透鏡來提高透光率，共聚焦成像速度高且靈敏度
也較高。
另一種很有價值的激光掃描顯微鏡采用了雙光子(和三光子)激
發(fā)來誘導熒光產(chǎn)熒光團吸收兩個光子時產(chǎn)生雙光子激發(fā)，每個光子
各自擁有促使熒光團進入激發(fā)態(tài)的能量的一半。只有在焦點位置的
光強度才能滿足同時吸收雙光子的需求，所以只有焦平面上的熒光
團才能被激發(fā)。因此，在檢測儀前不安裝空問濾光片的情況下，雙
光子激發(fā)仍可以進行光切。此外，由于焦點外的熒光團不被激發(fā)，
所以與傳統(tǒng)的激光掃描顯微鏡相比，它的標本不容易發(fā)生光漂白。
與單光子激發(fā)相比，雙光子吸收用以激發(fā)可見光熒光團所需的波長
更長、組織穿透力更好，因此能檢測標本更深處的結(jié)構。另外，傳
統(tǒng)激光掃描顯微鏡選用紫外波長時，紫外熒光團成像會出現(xiàn)較多問
題，但如果使用雙光子激光掃描顯微鏡，則許多問題都不會發(fā)生。
目前雙光子共聚焦顯微鏡的一個缺點是合適的激光器的價格太高。
現(xiàn)在市場上已有雙光子掃描顯微鏡(Bio—Rad，Leica)。應用指南
成像參數(shù)的優(yōu)化物鏡選擇
由于大數(shù)值孔徑的物鏡比小數(shù)值孔徑的物鏡采光多(亮度相當
于NA4)，所以通常熒光顯微鏡最好選用大數(shù)值孔徑的物鏡。大多數(shù)
高質(zhì)量大數(shù)值孔徑的物鏡的可見光波長頁
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激光掃描顯微鏡采用了雙光子(和三光子)來激發(fā),金相顯微鏡現(xiàn)貨供應
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