本文標(biāo)題："不復(fù)染切片反差太弱，電子顯微鏡照片結(jié)構(gòu)會模糊"
發(fā)布者：yiyi ------ 分類: 行業(yè)動態(tài) ------
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不復(fù)染切片反差太弱，電子顯微鏡照片結(jié)構(gòu)會模糊
后固定
后固定一般用俄酸，超薄切片經(jīng)鈾—鉛復(fù)染后電鏡觀察。但復(fù)
染除有模糊重要細(xì)節(jié)的危險外．復(fù)染溶液對細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)物有劇
烈的作用。Lewis和Knight(1977)曾在腎上腺髓質(zhì)進(jìn)行乙酰膽堿酯
酶(ACHE)反應(yīng)，一張切片不復(fù)染作對照，一張切片用枸櫞酸鉛室溫
染5mia，結(jié)果每個軸突周邊的大部分有增強(qiáng)的AChE染色。一張切片
用醋酸雙氧鈾酒精溶液60℃染10rain，大部分AChE反應(yīng)產(chǎn)物從軸突
上脫掉。所以，電鏡酶細(xì)胞化學(xué)應(yīng)避免進(jìn)行復(fù)染，只有確證復(fù)染不
干擾其結(jié)果的情況下，才采用復(fù)染以提高反差。
不復(fù)染的切片反差太弱，電鏡照片結(jié)構(gòu)模糊。Karnovsky(1964
)用亞鐵氰化鉀還原餓酸代替一般5我酸進(jìn)行后固定，可獲得較好的
反差，避免了復(fù)染。后固定時配制3％亞鐵氰化鉀水溶液(現(xiàn)配現(xiàn)用
)和2％餓酸水溶液(常規(guī)電鏡保存液)，兩液等量混合，立即用于后
固定。4℃或室溫下固定時間在1h以內(nèi)。時間太長，有的反應(yīng)產(chǎn)物
也會被溶解。后固定后要充分漂洗，再保存于二甲呻酸鈉緩沖液中
，4℃可保存幾天再包埋。
脫水、包埋、超薄切片
1．脫水
按常規(guī)電鏡技術(shù)進(jìn)行脫水，但脫水時間比常規(guī)要短些，尤其是
在低濃度酒精或丙酮中停留的時間要短些，以免某些反應(yīng)產(chǎn)物被溶
解掉。
2．包埋
對于用倒扣包埋法進(jìn)行電鏡酶細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)，一般在玻片上進(jìn)
行孵育反應(yīng)，脫水后，把包埋劑直接滴在光鏡下已確定的酶反應(yīng)部
位進(jìn)行滲透，再在2號膠囊中裝滿包埋劑，把膠囊倒扣在反應(yīng)部位
進(jìn)行聚合，聚合完后，可用二種方法把膠囊從玻片上取下來，一種
方法是把玻片放在酒精燈上烤，烤至合適溫度，
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